6月15日，來(lái)自美國(guó)斯克里普斯研究所的研究團(tuán)隊(duì)在《Science》上發(fā)表了SARS-CoV-2中和抗體的最新研究成果，其分離了針對(duì)受體結(jié)合結(jié)構(gòu)域（RBD）上兩個(gè)表位以及對(duì)刺突蛋白（S）上不同的非RBD表位的有效中和抗體（nAbs），發(fā)現(xiàn)nAbs的使用可為遭受大劑量SARS-CoV-2攻擊的敘利亞倉(cāng)鼠提供保護(hù)。

DOI: 10.1126/science.abc7520

具體來(lái)說(shuō)，研究人員在加利福尼亞州招募了曾感染SARS-CoV-2的17位患者，收集其外周血單核細(xì)胞（PBMC）和血漿。同時(shí)開(kāi)發(fā)了可產(chǎn)生強(qiáng)大及可重復(fù)的病毒滴度的HeLa-ACE2細(xì)胞系，利用偽病毒（PSV）中和測(cè)定方法測(cè)試了供體血漿與重組SARS-CoV-2的S蛋白和受體結(jié)合域（RBD）蛋白質(zhì)的結(jié)合作用。

結(jié)果發(fā)現(xiàn)，供體血漿與SARS-CoV-2 S蛋白的結(jié)合效價(jià)變化很大，但對(duì)RBD的效價(jià)降低了一個(gè)數(shù)量級(jí)。

SARS-CoV-2中和抗體分離策略

隨后，研究人員對(duì)其中8個(gè)供體進(jìn)行單克隆抗體（mAb）鑒定，克隆并表達(dá)了2045種抗體，測(cè)試了其與RBD和S蛋白的結(jié)合以及SARS-CoV-2 PSV測(cè)定的中和作用。

結(jié)果出人意料，病毒感染對(duì)S蛋白的非RBD區(qū)域反應(yīng)更為強(qiáng)烈，但只有小部分被中和。相反，RBD結(jié)合抗體較少，但可中和較高比例的SARS-CoV-2偽病毒。

SARS-CoV抗原結(jié)合和中和的抗體分離和功能篩選

接著，研究人員利用S蛋白和RBD蛋白作為捕獲抗原檢測(cè)結(jié)合至非競(jìng)爭(zhēng)位點(diǎn)的抗體，發(fā)現(xiàn)了RBD的三個(gè)抗原決定簇箱（RBD-A，RBD-B和RBD-C）和S蛋白的三個(gè)抗原決定簇箱（SA，SB和SC）。

于是，他們繼續(xù)評(píng)估了單克隆抗體針對(duì)SARS-CoV-2和SARS-CoV-1假病毒的中和活性。結(jié)果顯示，最有效的中和抗體是針對(duì)RBD-A表位的抗體，包括兩種抗體CC6.29和CC6.30，可高效中和SARS-CoV-2假病毒，而CC6.33針對(duì)RBD-B，可同時(shí)中和SARS-CoV-2和 SARS-CoV-1。

經(jīng)過(guò)細(xì)胞表面競(jìng)爭(zhēng)實(shí)驗(yàn)和表面等離子體共振（SPR）實(shí)驗(yàn)，研究人員確定了表位RBD-A是引發(fā)中和抗體的優(yōu)選靶標(biāo)，且mAb與RBD-A的親和力相應(yīng)增加可能會(huì)導(dǎo)致中和力相應(yīng)增加。值得注意的是，上述3種抗體均可中和目前已突變的SARS-CoV-2病毒。

SARS-CoV-2特異性中和單抗在敘利亞倉(cāng)鼠中保護(hù)體重減輕和肺病毒復(fù)制

為了研究體外具有中和作用的抗體在體內(nèi)對(duì)SARS-CoV-2的保護(hù)，研究人員篩選出兩個(gè)mAb處理了敘利亞倉(cāng)鼠動(dòng)物模型。以抗登革熱病毒的無(wú)關(guān)抗體Den3作為對(duì)照，將倉(cāng)鼠稱重作為由感染引起的疾病量度。

結(jié)果表明，接受CC12.1且靶向RBD-A表位處理中，對(duì)照組平均體重下降13.6％，而以2 mg或500μg劑量接受中和性RBD-A抗體的實(shí)驗(yàn)組無(wú)體重減輕，利用實(shí)時(shí)PCR測(cè)定其肺病毒載量進(jìn)一步驗(yàn)證。研究人員在敘利亞倉(cāng)鼠鼻內(nèi)病毒攻擊前測(cè)量了抗體血清濃度，發(fā)現(xiàn)抗體血清濃度約為22μg/ ml的nAb時(shí)可提供全面保護(hù)，血清濃度為12μg/ ml時(shí)足以降低50％體重減輕所致的疾病。但在感染部位預(yù)防疾病所需的有效抗體濃度仍有待確定。

總結(jié)來(lái)說(shuō)，該研究表明，nAb在預(yù)防和潛在治療COVID-19中發(fā)揮作用。同時(shí)，nAb也定義了保護(hù)性表位，可用于指導(dǎo)疫苗設(shè)計(jì)。

值得注意的是，除了這項(xiàng)研究，《Science》同日還發(fā)表了另外4篇關(guān)于新冠病毒抗體的研究結(jié)果，包括人源中和抗體以及抗體“雞尾酒療法”等。此前新冠病毒中和抗體的成果也頻頻刊登。我們期待這些研究成果能夠盡快推動(dòng)臨床應(yīng)用開(kāi)發(fā)，為治療和預(yù)防新冠肺炎提供強(qiáng)有力的醫(yī)學(xué)干預(yù)手段。